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色谱柱在相应的色谱条件下是否可靠并具有持久性能?
点击次数:140 发布时间:2019-05-08

已经证实ACE HPLC色谱柱和ACE Excel UHPLC色谱柱具有持久耐用的、可靠的日常性能和卓越的色谱柱寿命。

通过键合在硅胶固定相载体上的硅氧烷的酸化水解可以失去键合相,从而降低色谱柱的寿命。该酸水解随着流动相pH的降低和柱温的升高而增加。

与C18相相比,较短的烷基相如C4和C3以及苯基相通常更容易失去键合相。此外,低纯度的硅胶固定相载体和低表面覆盖的固定相载体使得一些键合相更易于酸解。
由于使用超高纯度的硅胶固定载体粒子以及键合相的极高表面覆盖,ACE键合相表现出极高的稳定性。(参见图9)
尽管所有ACE键合相的稳定性都很优异,但是一些键合相并不像其它键合相那样稳定。例如,通常认为C18键合比柱长较短的烷基相、PFP相和苯基键合相更稳定。

实际上,典型的苯基固定相稳定性不佳是该相在方法开发中不常被选择的主要原因之一。
为了解决这个问题而开发了ACE C18-AR,其允许色谱分析利用强大的π-π和偶极-偶极分离机制,并仍然享有C18相的坚固性及耐用性。

如图10所示,ACE C18-AR不仅对典型的苯基键合相具有非常优异的稳定性,它甚至还比许多其他C18键合相表现出更佳的稳定性。

类似地,ACE C18-PFP提供了多种分离机制,可以利用它们实现更佳的总体分离效果,同时从C18相的稳定性中受益。

 

图 9:酸稳定性,pH 1.8

条件
色谱柱:ACE 4.6 x 150 mm
流动相:50% CH3CN, 50%水
流速:1.0 mL/min
温度:22 °C
分析物:菲

酸性暴露条件:
流动相:50% CH3CN 50% 0.1%TFA(溶于水中)(pH 1.8)
流速:1.0 mL/min
温度:22 ℃

 

图10:加速柱稳定性研究:pH 1.9时80℃

酸性暴露条件:
流动相:5:95 MeOH/0.1% TFA(溶于水中)(pH 1.9)
流速:0.20 mL/min
温度:80 ℃
色谱柱尺寸:50 x 2.1mm
分析物:菲

 

使用设计用于加速柱降解下的条件,ACE C18-AR相显示保留损失极少,其寿命相当于高度稳定的ACE C18相。两种固定相均由相同的超纯硅胶而制成,而且比Zorbax SB-C18的耐久性更好(Zorbax SB-C18曾视作在高温和低pH条件下具有极好稳定性的固定相)。
正如预期的那样,基于低纯度硅胶(Waters Spherisorb ODS2)的C18键合柱在这些加速条件下寿命大大降低。
特别值得注意的是常规苯基色谱柱与ACE C18-AR的寿命比较结果。与ACE C18-AR相比,尽管使用高纯度二氧化硅,苯基色谱柱的寿命仍降低,这表明ACE C18-AR可能适用于那些使用苯丙基色谱柱寿命短的应用。

 

将HPLC和UHPLC连接到通常被称为LC-MS的质谱仪上已经相当普遍。

然而,质谱对可能从HPLC/UHPLC色谱柱上洗脱下来的微量的键合相(称为柱“流失”)非常敏感。柱

流失可能会干扰分析结果,并且重要的是,LC-MS应用中所选择的色谱柱具有足够稳定的键合相以避免过量的柱流失。

图11表明ACE C18-PFP色谱柱几乎没有“流失”干扰LC-MS分析。

C18-PFP(以及ACE C18和ACEC18-AR)的稳定性使得这些色谱柱更适合LC-MS应用。

 

图 11:ACE C18-PFP色谱柱的低柱流失使其成为LC/MS应用中的理想选择

条件
色谱柱尺寸:50 x 3.0 mm
流动相:梯度:在5分钟内从5至95% B,95% B时持续5分钟
A: 0.1%甲酸(溶于水中)
B: 0.1%甲酸(溶于乙腈中)
流速:0.43 mL/min
温度:60ºC
检测:安捷伦1100 MSD ESI正离子快速扫描模式,快速扫描全50 – 1000 m/z
样品:空白运行

 

柱流失可能会干扰LC-MS应用中目标分析物的检测和测量。

ACE C18-PFP色谱柱未显示柱流失。

所有ACE色谱柱的低流失特性使其非常适合LC-MS应用。

UHPLC色谱柱可能缺乏耐用性。加上入口筛板堵塞的可能性,您可能面临色谱柱的耐用性不如HPLC色谱柱的问题。

ACE Excel色谱柱非常宽容,并提供您期望从HPLC色谱柱中获得的相同耐用性和使用寿命。

 

ACE Excel将改变您对UHPLC色谱柱耐用性的看法。

ACE Excel色谱柱不仅填装的更好,还采用了转利的入口筛板设计,使其比其它UHPLC色谱柱更不容易被堵塞。

仍建议您像使用任何UHPLC色谱柱一样过滤样品和流动相,但ACE Excel色谱柱比其他UHPLC色谱柱更为宽容,并提供与HPLC色谱柱相同的耐用性和使用寿命。

 

图 12:ACE Excel色谱柱在耐用性方面有良好的口碑

将2.1×100mm ACE Excel C18 UHPLC色谱柱在平均1,000 bar(14,500 psi)压力下进行2000多个梯度的运行。

在该稳定性研究结束时,柱效(塔板数)和保留时间基本保持不变。

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