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梯度PCR仪的温度控制指标包括哪三个方面?
点击次数:335 发布时间:2018-12-20
PCR,中文译为聚合酶链式反应,其实是一种DNA的快速扩增技术,其扩增效率之高就象核裂变的“链式反应”那样。PCR技术通过两个短的称为引物的DNA小片段和一种耐热的酶的作用。
 
梯度PCR仪把一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(温度梯度),通常有12种温度梯度,这样的仪器就叫梯度PCR仪。因为被扩增的不同DNA片段,其适退火温度是不同的,通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增,从而一次性PCR扩增,就可以筛选出表达量高的适退火温度,进行有效的扩增。主要用于研究未知DNA退火温度的扩增,这样节约成本的同时也节约了时间。主要用于科研,教学机构。梯度PCR仪,在不设置梯度的情况下也可以做普通PCR扩增。具有双槽梯度的不多,领成具备此功能。
 
梯度PCR仪温度控制指标包括哪三个方面?
 
1、温度的准确性:是指样品孔温度与设定温度的一致性,它直接关系到实验的成败。由于PCR是一个几何级数扩增的过程,不论是变性、退火还是延伸都需要准确控制温度,对退火温度而言温控显的尤为重要,有时1°甚至0.5°的差异也能决定实验的成功与失败,所谓差之毫厘,谬之千里。因而对PCR扩增仪而言温度控制就意味着质量。
 
2、温度的均一性:是指样品孔间的温度差异,它关系到在不同样品孔进行反应结果的一致性。有用户发现用同样的样品,同样的PCR反应程序,后的结果竟然差异非常明显,或许就是因为不同位置的温度不均匀所致。同时位置边缘效应对PCR实验可重复性影响非常明显。
 
3、升降温速率:更快的升降温速度,可以缩短反应进行的时间,而且缩短了可能的非特异性结合、反应的时间,能提高PCR反应的特异性。
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